Hemos comenzado la parte netamente experimental de nuestro proyecto ensayando el efecto de un determinado sonido sobre el crecimiento de las bacterias. Para ello hemos elegido el sonido grabado por Irene con su violonchelo. La nota mantenida es un La, a una frecuencia de 220 Hz. El procedimiento ha sido el siguiente.
En la sesión de ayer preparamos cultivos líquidos de las tres bacterias que vamos a estudiar. Esta mañana, una vez crecidos, hemos inoculado matraces con 20 mililitros de medio de cultivo líquido TSB (caldo de triptona de soja y caseína) con 0,5 ml de cultivos en fase estacionaria crecidos desde el día antes. Se han dividido en dos lotes, uno de ellos se ha incubado a 37ºC en una estufa, en cuyo anterior se ha situado un altavoz conectado vía bluetooth a un ordenador desde el que se repetía la nota emitida en bucle con una intensidad de sonido de unos 60 dB. En el segundo, el experimento control, se han incubado los matraces a la misma temperatura, en este caso sin sonido. Se han tomado muestras iniciales y a la hora, dos horas, tres horas y cinco horas y se han hecho tres lecturas de densidad óptica o absorbancia de cada una de ellas en un espectrofotómetro Shimadzu, a una longitud de onda de 600 nm, calculándose después el valor medio. El experimento con E. coli se ha realizado por duplicado aunque los datos se han agrupado para los gráficos. Los valores medios de las lecturas para cada microorganismo, en presencia de sonido (rojo) o sin él (azul), se representan en las gráficas de abajo.
Los datos numéricos se muestran en la tabla siguiente:
A partir de los datos numéricos podemos hacer cálculos interesantes que nos pueden permitir interpretar los resultados. Como hemos comentado antes, estamos estimando el crecimiento de los microorganismos midiendo la densidad óptica de los cultivos; esta es la absorción de luz que causa la suspensión de bacterias. La longitud de onda estándar para las bacterias es de 600 nm.
El crecimiento de las bacterias en un medio de cultivo sigue una curva sigmoide, con una fase de crecimiento exponencial en la que el cultivo duplica el número de células cada cierto intervalo de tiempo. A esta le sigue una etapa de transición hacia una fase estacionaria, en la que se mantiene el número de bacterias en el cultivo; a partir de ahí, y por agotamiento de los nutrientes, el número de bacterias decrece. A partir de las medidas de densidad óptica podemos valorar en qué estado se encuentra el crecimiento de nuestros microorganismos. Y para ello Manuel Espinosa nos propone usar esta aplicación
https://punnettsquare.org/od-growth-calculator/
Introduciremos las medidas de DO inicial y final y el intervalo de tiempo que transcurre entre estas dos medidas. Repetiremos estas medidas para todos los intervalos y compararemos los resultados. Nuestra valoración de todo lo anterior lo dejaremos como comentario a esta entrada del blog.
